کلونینگ ، بیان ژن، خالص سازی و تعیین خصوصیات آنزیم الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا

نویسندگان

سمیه احتشام

somayeh ehtesham ehtesham department of biology, faculty of sciences, islamic azad university, parand branch,tehran-iranگروه زیست شناسی ، دانشکده علوم زیستی ، دانشگاه آزاد اسلامی واحدپرند، تهران،ایران سید محسن اصغری

s. mohsen asghari department of biology, faculty of science, university of guilan, guilan -iranگروه زیست شناسی ، دانشکده علوم پایه ، دانشگاه گیلان، گیلان، ایران افسانه صدر ممتاز

afsaneh sadre momtaz department of biology, faculty of science, university of guilan, guilan -iranگروه زیست شناسی ، دانشکده علوم پایه ، دانشگاه گیلان، گیلان، ایران

چکیده

سابقه و هدف: الاستاز حاصل از سودوموناس آئروجینوزا یک آنزیم مهم در زمینه مطالعات بنیادی بر روی zn-متالوپروتئازها و نیز بعنوان فاکتور ویرولانس این باکتری مطرح است. در این مطالعه ژن مربوط به آنزیم الاستاز از سودوموناس آئروجینوزا (pae) استخراج و کلون شده و پس از بیان و تخلیص، خصوصیات بیوشیمیایی آن شامل دما و ph بهینه و نیز فعالیت در حور حلالهای آلی گلیسرول، دی متیل فرمامید (dmf)، متانول، اتانول، اتیلن گلایکول و ایزوپروپانول مورد مطالعه قرار گرفت. مواد و روشها: تایید گونه باکتری با تستهای بیوشیمیایی شامل سیترات، sim، mr-vp و tsi انجام شد. dna ژنومی توسط کیت استخراج و با پرایمر اختصاصی بوسیله pcr ژن الاستاز بدست آمد. کلونینگ در وکتور pet21a(+) با مکان های برش hindiii و ndei صورت گرفت. ترانسفورماسیون به روش شیمیایی انجام شد. سپس سلول ها در محیط lb تحت القای iptg 1mm قرار گرفته و زمان و شرایط تولید بهینه گردید. یافته ها: بدنبال تایید گونه باکتریایی توسط تستهای بیوشیمیایی، dna ژنومی استخراج شد و سپس ژن pae به کمک پرایمر اختصاصی توسط pcr جدا شد. ژن الاستاز که بصورت پری پرو الاستاز کد می شود، درون وکتور) pet21a(+ کلون و در باکتری e. coli سویه bl21 ترانسفورم گردید. آنالیز سکانس نوکلئوتیدی ژن یک چارچوب خوانش (orf) دارای 1497 جفت باز که 497 آمینواسید را کد می کند نشان داد. بدنبال القاء به کمک iptg آنزیم فعال در درون سلول یافت شد. سپس آنزیم توسط کروماتوگرافی تمایلی تخلیص گردید. بررسی خصوصیات آنزیم از قبیل دمای بهینه، ph بهینه و غیر فعال سازی حرارتی برگشت ناپذیرانجام شد و همچنین فعالیت آنزیم در حضور حلالهای آلی بررسی گردید و بخوبی نشان داده شد که آنزیم مذکور از مقاومت و فعالیت بسیار بالایی در حلالهای آلی برخوردار است. نتیجه گیری:آنزیم الاستاز سویه ptcc 1430 در مقایسه با آنزیم سویه pao1، که ساختار کریستالی آن تعیین شده، تنها یک تغییر در ناحیه سیگنال را نشان می دهد. خصوصیات بیوشیمیایی نشان می دهد که الاستاز یک آنزیم با پایداری زیاد در حلال های آلی است.

برای دانلود باید عضویت طلایی داشته باشید

برای دانلود متن کامل این مقاله و بیش از 32 میلیون مقاله دیگر ابتدا ثبت نام کنید

اگر عضو سایت هستید لطفا وارد حساب کاربری خود شوید

منابع مشابه

کلونینگ ، بیان ژن، خالص سازی و تعیین خصوصیات آنزیم الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا

سابقه و هدف: الاستاز حاصل از سودوموناس آئروجینوزا یک آنزیم مهم در زمینه مطالعات بنیادی بر روی Zn-متالوپروتئازها و نیز بعنوان فاکتور ویرولانس این باکتری مطرح است. در این مطالعه ژن مربوط به آنزیم الاستاز از سودوموناس آئروجینوزا (PAE) استخراج و کلون شده و پس از بیان و تخلیص، خصوصیات بیوشیمیایی آن شامل دما و pH بهینه و نیز فعالیت در حور حلالهای آلی گلیسرول، دی متیل فرمامید (DMF)، متانول، اتانول، ا...

متن کامل

کلونینگ، بیان ژن، خالص سازی و تعیین خصوصیات آنزیم acc دآمیناز از باکتری سودوموناس فلورسنس

گروهی از باکتری های همزیست با گیاهان، تحت عنوان pgpr (باکتری های محرک رشد گیاهان) آنزیمی به نام acc دآمیناز (ec4.1.99.4) را کد می کنند که این آنزیم، تنظیم کننده ی تولید اتیلن از طریق متابولیزه نمودن acc (حد واسط بیوسنتز اتیلن) و شکستن آن به آمونیاک و α-کتوبوتیرات می باشد. این آنزیم نقش مهمی در تسهیل رشد گیاهان از طریق کاهش میزان اتیلن بخصوص در شرایط سخت محیطی دارد. بنابراین هدف این مطالعه، بیان...

متن کامل

کلونینگ، بیان ژن، خالص سازی و تعیین خصوصیات آنزیم acc دآمیناز از باکتری سودوموناس فلورسنس**article uncorrected proof**

گروهی از باکتری های همزیست با گیاهان، تحت عنوان pgpr (باکتری های محرک رشد گیاهان) آنزیمی به نام acc دآمیناز (ec4.1.99.4) را کد می کنند که این آنزیم، تنظیم کننده ی تولید اتیلن از طریق متابولیزه نمودن acc (حد واسط بیوسنتز اتیلن) و شکستن آن به آمونیاک و α-کتوبوتیرات می باشد. این آنزیم نقش مهمی در تسهیل رشد گیاهان از طریق کاهش میزان اتیلن بخصوص در شرایط سخت محیطی دارد. بنابراین هدف این مطالعه، بیان...

متن کامل

مطالعه خصوصیات بیوشیمی الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا سویه‌ی PTCC1430

سابقه و هدف:  متالوپروتئازها کاربردهای فراوانی در صنعت از جمله در سنتز پپتید و آسپارتام دارند . با این وجود استفاده از آن ها با محدودیت هایی از قبیل ناپایداری به سبب اتولیز مواجه است. در تحقیق حاضر خصوصیات بیوشیمیایی یک متالوپروتئاز (الاستاز) حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا پس از خالص سازی مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش ها: با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی پروتئین نوترکیب از E. coli خالص...

متن کامل

مطالعه خصوصیات بیوشیمی الاستاز حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا سویه ی ptcc۱۴۳۰

سابقه و هدف:  متالوپروتئازها کاربردهای فراوانی در صنعت از جمله در سنتز پپتید و آسپارتام دارند . با این وجود استفاده از آن ها با محدودیت هایی از قبیل ناپایداری به سبب اتولیز مواجه است. در تحقیق حاضر خصوصیات بیوشیمیایی یک متالوپروتئاز (الاستاز) حاصل از باکتری سودوموناس آئروجینوزا پس از خالص سازی مورد بررسی قرار گرفت. مواد و روش ها: با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی پروتئین نوترکیب از e. coli خالص...

متن کامل

کلونینگ، بیان، خالص سازی و ارزیابی آنزیم لیزواستافین نوترکیب با استفاده از سیستم کلونینگ pBAD

Background and purpose: Staphylococcus aureus is an important nosocomial pathogen which causes some diseases such as endocarditis, osteomyelitis, pneumonia, toxic shock syndrome, and food poisoning. The excessive and inappropriate use of antibiotics in the treatment of these diseases causes resistance to many antibiotics. Lysostaphin is an effective agent in the treatment of staphylococcal infe...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید


عنوان ژورنال:
مجله تازه های بیوتکنولوژی سلولی - مولکولی

جلد ۲، شماره ۷، صفحات ۲۷-۳۴

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023